Método de medição da aflatoxina do milho
A aflatoxina, abreviada como AFT em inglês, é um composto composto por um anel difuranil e cumarina (oxanaftoquinona).,Com um peso molecular de 312-346 e um ponto de fusão de 200-300 °C. Tem propriedades estáveis e resistentes a altas temperaturas e pode produzir fluorescência sob luz ultravioleta de longa onda.É dividido em B1, B2, G1, G2, M1, M2, P1, R1, GM e álcoois tóxicos de acordo com diferentes cores de fluorescência, valores de RF e estruturas.
A AFT é insolúvel em água, etano, éter e éter de petróleo, mas facilmente solúvel em solventes orgânicos como metanol, etanol, cloroformo, acetonitril e dimetilformamida.A AFT pode decompor-se ligeiramente em solventes ácidos com pH de 1-3, decompõem-se rapidamente e decompõem-se em soluções com pH de 9-10, decompõem-se rapidamente quando expostos a álcalis e decompõem-se em sais quase não tóxicos em soluções alcalinas com pH de 9-10.Pode ser reduzido em condições ácidas.
Objectivo da experiência
A aflatoxina refere-se a algumas substâncias cancerígenas altamente tóxicas produzidas por fungos.sintomas comuns de disfunção hepática, como febreA exposição prolongada a doses baixas (20 microgramas/ kg de peso corporal) pode aumentar significativamente o risco de cancro do fígado, cancro gástrico e outras doenças.Uma vez que está muito presente nas culturas e nos alimentos e causa grandes danos aos seres humanos e aos animais, o estabelecimento de métodos de detecção rápidos e precisos é de grande importância para garantir a segurança dos alimentos e a saúde pública.
O objetivo deste experimento é utilizar o princípio do ensaio de imunossorbente ligado a enzimas em fase sólida (ELISA), nomeadamente o ensaio de imunossorbente ligado a enzimas (ELISA),Limitar e quantificar o teor de aflatoxina B1 nas amostras, fornecendo uma base científica para a avaliação do risco de contaminação dos alimentos.
Aparelhos experimentais
1 analisador de micotoxinas ST-2000A
2 Milho, homogeneizador, dispositivo de secagem de azoto, oscilador, centrífuga, pipeta graduada, balança (sensibilidade 0,01 g), micropipeta, metanol, n-hexano, cloroformo ou reagente de diclorometano
Procedimento experimental
1 Verifique se o equipamento usado no experimento está limpo, seco e livre de contaminação
2 Misturar metanol e água deionizada numa proporção de 7:3 para preparar a solução de extracção da amostra
3 Tomar 2 g de amostra de milho triturado e colocá-la num tubo centrífugo de 50 ml. Adicionar 5 ml de solução de extracção da amostra e agitar durante 5 minutos a temperatura ambiente de 4000 rpm durante 10 minutos.tomada 0.5 ml de supernatante e adicionar 0,5 ml de água deionizada.
4 Retirar os reagentes necessários do ambiente refrigerado a 4 °C, deixá-los equilibrarem-se à temperatura ambiente durante 30 minutos e agitar bem.e diluir 20 vezes a solução de lavagem concentrada com água deionizada para obter a solução de lavagem de trabalho.
5 Numerar os microporos correspondentes da amostra e do padrão em sequência, fazer 2 poços paralelos para cada amostra e padrão e registar as posições dos poços padrão e dos poços de amostra.Adicionar 50 μl/poço de amostra padrão ou de amostra aos respetivos microporos, depois adicionar 50 μl/ poço de marcador enzimático e, em seguida, adicionar 50 μl/ poço de solução de trabalho de anticorpos.Reagir a 25 °C durante 30 minutos.
Retirar a película de cobertura, agitar o líquido no interior do buraco e lavar cuidadosamente 5 vezes com 250 μl de detergente funcional por buraco, com um intervalo de 30 segundos entre cada lavagem.Use papel absorvente para secar
Adicionar solução de substrato A (50 μl) a cada poço, seguido de solução de substrato B (50 μl). Agitar durante 5 segundos e misturar bem.
Adicionar 50 μl de solução de terminação a cada poço, agitar suavemente e misturar bem para terminar a reacção.
Medir o valor de absorção de cada poço a 450 nm com um analisador de aflatoxinas (recomenda-se um comprimento de onda duplo de 450/630 nm).A medição deve ser concluída no prazo de 10 minutos após o término da reação.
10 O instrumento completa a medição e fornece automaticamente o resultado
Resultados experimentais
Após o teste, o teor de aflatoxinas da amostra é de aproximadamente 0,19ug/kg, o que atende à norma GB 2761-2017 "Norma Nacional de Segurança Alimentar para Limites de Toxinas Fúngicas nos Alimentos".