Comprimento de onda ELISA para teste de micotoxinas 400 - 999nm Detecção de Aflatoxina B1 ST-2000A

ST-2000A Testador de Micotoxinas

O analisador de micotoxinas ST-2000A é um instrumento analítico necessário para aflatoxina e imunoensaio de ligação enzimática. O princípio do imunoensaio de ligação enzimática em fase sólida (ELISA), ou seja, imunoensaio de ligação enzimática (ELISA), é composto por este instrumento e kit B1, que pode ser usado para determinar o teor de aflatoxina B1 e outras micotoxinas em amostras de forma limitada e quantitativa (se equipado com outros kits, outras toxinas podem ser detectadas). É amplamente utilizado na detecção de aflatoxina B1 e outras micotoxinas em alimentos, rações, óleos, produtos lácteos, medicamentos, bebidas, vinhos e outros produtos.

Características de desempenho:

1. Operação de exibição: tela LCD colorida, placa de distribuição de videofone, exibição de informações de placa inteira, operação de tela sensível ao toque

2. Função de placa vibratória: velocidade de placa vibratória de nível 3, tempo ajustável de 0 a 255 segundos

3. Estação de trabalho: software profissional de marcador enzimático, que pode armazenar 500 grupos de programas, 100.000 resultados de amostras e fornecer modos de cálculo ricos, como absorbância, equação linear, equação logarítmica, equação quadrática, equação cúbica, equação logarítmica de concentração de porcentagem de absorbância, função spline, taxa de inibição, etc.

Parâmetros técnicos:

1 Princípio e aplicação

Este kit utiliza o método ELISA competitivo indireto para detectar aflatoxina B1 (AFB1) em grãos, rações e outras amostras. O kit é composto por placa marcada com enzima pré-revestida com antígeno conjugado, marcador de enzima de horseradish, anticorpo, padrão e outros reagentes correspondentes. Durante o teste, adicione a solução padrão ou de amostra, a aflatoxina B1 na amostra e a placa enzimática pré-revestida com o antígeno conjugado competem pelo anticorpo anti-aflatoxina B1. Após a adição do marcador enzimático, use o substrato TMB para desenvolver a cor. O valor de absorbância da amostra é inversamente proporcional ao teor de aflatoxina B1 contido na amostra. A quantidade residual de aflatoxina B1 na amostra pode ser obtida comparando com a curva padrão.

2 Indicadores técnicos

2.1 Sensibilidade do kit: 0,03ppb (ng/ml)

2.2 Modo de reação: 25 ℃, 30min~15min

2.3 Limite inferior de detecção:

Grãos...................................................... 0,15ppb

Ração formulada.......................................... 0,3 ppb

Óleo comestível, amendoim.................................... 0,6ppb

Molho de soja, trigo e outras rações.............................. 0,3 ppb

Cerveja.......................................... 0,3 ppb

Vinho, molho de soja, vinagre.................................... 0,15ppb

2.4 Taxa de reação cruzada:

Aflatoxina B1 100%

2.5 Taxa de recuperação da amostra:

Grãos e ração formulada.............................. 85% ± 15%

Amendoim.................................... 82 ± 15%

Óleo comestível.................................... 85 ± 15%

Molho de soja, trigo e outras rações.............................. 83 ± 15%

Cerveja.................................... 84 ± 15%

Vinho, molho de soja, vinagre............ 87 ± 15%

3 Composição do kit

Placa marcada com enzima.................................... 96 poços

Solução padrão (tampa preta): 1ml cada

0ppb,0,03ppb,0,06ppb,0,12ppb,0,24ppb,0,48ppb

Solução padrão alta: 100ppb.............................. 1ml

Marcador enzimático (tampa vermelha).............................. 5,5ml

Solução de trabalho de anticorpo (tampa azul).............................. 5,5ml

Solução substrato A (tampa branca).............................. 6ml

Líquido substrato B (tampa preta).............................. 6ml

Solução de terminação (tampa amarela).............................. 6ml

Solução de lavagem concentrada 20X (tampa branca)..................... 40ml

Manual de instruções.....................1 cópia

4 Equipamentos e reagentes necessários

4.1 Aparelho: testador de aflatoxina, impressora, homogeneizador, secador de nitrogênio, oscilador, centrífuga, pipeta graduada, balança (sensibilidade 0,01g)

4.2 Micropipeta: canal único 20 µ l-200 µ l, 100 µ l-1000 µ l, multicanal 300 µ l

4.3 Reagente: metanol, n-hexano, triclorometano ou diclorometano

5 Pré-tratamento da amostra

5.1 Instruções antes do processamento da amostra:

O aparelho experimental deve estar limpo e usar ponta de sucção descartável para evitar contaminação e interferência nos resultados experimentais.

5.2 Preparação da solução:

Solução 1: extrato da amostra

70% metanol, ou seja, V metanol: V água deionizada=7:3.

5.3 Etapas de pré-tratamento da amostra:

5.3.1 Método de processamento de grãos

1) Pese 2g de amostra triturada em um tubo de centrífuga de 50ml, adicione 5ml da solução de extração da amostra, agite por 5 minutos, 4000 rpm à temperatura ambiente/10 minutos de centro de separação;

2) Retire 0,5ml do sobrenadante, adicione 0,5ml de água deionizada e misture bem;

3) Retire 50 μ L Análise.

Razão de diluição da amostra: 5 Limite inferior de detecção: 0,15ppb

5.3.2 Métodos de processamento para amostras com forte absorção de água, como casca de milho e farelo de trigo

1) Pese 2g de amostra triturada em um tubo de centrífuga de 50ml, adicione 20ml da solução de extração da amostra, agite por 5 minutos, 4000 rpm à temperatura ambiente/10 minutos de centro de separação;

2) Retire 0,5ml do sobrenadante, adicione 0,5ml de água deionizada e misture bem; (Para a amostra com teor de toxina extremamente alto, ela pode ser diluída com 35% de metanol e depois testada. Por exemplo, retire 0,1ml da solução mista em 2) e 0,9ml de 35% de metanol para misturar. A razão de diluição final da amostra é 200 e o limite de detecção é 6ppb.)

3) Retire 50 μ L Análise.

Razão de diluição da amostra: 20 Limite inferior de detecção: 0,6ppb

Nota: Devido à distribuição desigual da toxina na amostra, é necessário coletar amostras de vários pontos e misturá-las completamente antes de retirar 2g para teste.

5.3.3 Método de processamento de ração formulada

1) Pese 2g de amostra triturada em um tubo de centrífuga de 50ml, adicione 10ml da solução de extração da amostra, agite por 5 minutos, 4000 rpm à temperatura ambiente/10 minutos de centro de separação;

2) Retire 0,5ml do sobrenadante, adicione 0,5ml de água deionizada e misture bem;

3) Retire 50 μ L Análise.

Razão de diluição da amostra: 10 Limite inferior de detecção: 0,3ppb

5.3.4 Métodos de tratamento de ração de óleo comestível, amendoim e alto teor de gordura

1) Pese 2g de amostra triturada em um tubo de centrífuga de 50ml, adicione 8ml de n-hexano e 10ml da solução de extração da amostra, agite por 5min, 4000 rpm à temperatura ambiente/10 min de centro de separação;

2) Remova o líquido superior, retire 0,5ml do líquido inferior e adicione 0,5ml de água deionizada, misture bem, em seguida, retire 0,5ml do líquido misturado e adicione 0,5ml de metanol a 35%, agite por 30s;

3) Retire 50 μ L Análise.

Razão de diluição da amostra: 20 Limite inferior de detecção: 0,6ppb

5.3.5 Alimentos ou condimentos como molhos, trigo, biscoitos, bolos e métodos de processamento de ração como concentrado de ração

1) Pese 2g de amostra triturada em um tubo de centrífuga de 50ml, adicione 10ml da solução de extração da amostra, agite por 5 minutos, 4000 rpm à temperatura ambiente/10 minutos de centro de separação;

2) Retire 2ml do sobrenadante, adicione 4ml de triclorometano (ou diclorometano), agite por 5 minutos, 4000 rpm à temperatura ambiente/10 minutos de centro de separação;

3) Transfira o líquido superior para outro recipiente, deixe o líquido inferior em espera, adicione mais 4ml de clorofórmio (ou diclorometano) ao líquido superior, agite e misture completamente por 5 minutos, e a temperatura ambiente é de 4000 rpm/centro de separação por 10 minutos;

4) Remova o líquido superior, combine o líquido inferior duas vezes e misture completamente;

5) Retire 2ml do líquido inferior combinado e seque sob nitrogênio a 50-60 ℃;

6) Adicione 0,5ml de extrato da amostra para dissolver completamente a substância seca, e então adicione 0,5ml de água deionizada e misture;

7) Retire 50 μ L Análise.

Razão de diluição da amostra: 10 Limite inferior de detecção: 0,3ppb

5.3.6 Método de processamento de cerveja

1) Agite completamente a cerveja (remova o CO2), retire 2ml de amostra de cerveja, adicione 1ml de água destilada, adicione 7ml de metanol e agite por 5min;

2) Retire 0,5ml da solução de amostra mista e adicione 0,5ml de água deionizada para misturar bem;

3) Retire 50 μ L Análise.

Razão de diluição da amostra: 10 Limite inferior de detecção: 0,3ppb

5.3.7 Método de tratamento de vinho, molho de soja e vinagre

1) Retire 2ml da amostra, adicione 2ml de água destilada, adicione 10ml de triclorometano (ou diclorometano), agite por 5 minutos, 4000 rpm à temperatura ambiente/10 minutos de centro de separação;

2) Retire 1ml do líquido inferior e seque sob nitrogênio a 50-60 ℃;

3) Adicione 0,5ml de extrato da amostra para dissolver completamente a substância seca, então adicione 0,5ml de água deionizada e misture bem;

5) Retire 50 μ L Análise.

Razão de diluição da amostra: 5 Limite inferior de detecção: 0,15ppb

6 Etapas do ELISA

Retire o reagente necessário do ambiente de armazenamento a frio de 4 ℃ e coloque-o à temperatura ambiente por mais de 30 minutos. Pode haver cristais que precisam ser restaurados à temperatura ambiente para dissolver completamente quando a solução de lavagem estiver em armazenamento a frio. Cada reagente líquido deve ser agitado antes do uso. Retire o número necessário de placas de micropoços e molduras, coloque as placas de micropoços não utilizadas em sacos autovedantes e armazene-as a 2-8 ℃.

Antes do experimento, a solução de lavagem concentrada 20X é diluída em solução de lavagem de trabalho por 20 vezes.

6.1 Numeração: numere os poços correspondentes da amostra e do padrão em sequência, faça dois poços paralelos para cada amostra e padrão, e registre a posição do poço padrão e do poço da amostra.

6.2 Reação de adição de amostra: adicione 50 µ l/poço de padrão ou amostra em seus respectivos poços, em seguida, adicione 50 µ l/poço de marcador enzimático, em seguida, adicione 50 µ l/poço de solução de trabalho de anticorpo, sele a placa com uma membrana de cobertura, agite suavemente por 5 segundos, misture e reaja a 25 ℃ por 30 minutos.

6.3 Lavagem: remova cuidadosamente a membrana de cobertura, seque o líquido no poço, lave completamente o poço com solução de lavagem de trabalho de 250 µ l/poço por 5 vezes, com intervalo de 30 segundos, e seque com papel absorvente (as bolhas que não foram removidas após a secagem podem ser perfuradas com uma ponta de pistola limpa).

6.4 Desenvolvimento de cor: adicione 50 µ l de solução substrato A e 50 µ l de solução substrato B a cada poço, agite suavemente por 5 segundos e misture bem, e desenvolva a cor no escuro a 25 ℃ por 15 minutos.

6.5 Terminação: adicione 50 µ l de solução de terminação a cada poço, agite suavemente e misture bem para terminar a reação.

6.6 Medição do valor de absorbância: use o testador de aflatoxina para medir o valor de absorbância de cada poço a 450 nm (recomenda-se comprimento de onda duplo 450/630 nm). A determinação deve ser concluída em 10 minutos após a terminação da reação

6.7 O testador automático de aflatoxina ST-2000A completa automaticamente a determinação e produz automaticamente os resultados.