Estabilidade do ELISA ≤ ± 0,003Abs Teste de micotoxinas ST-2000A Faixa de comprimento de onda 400-900nm

Testador de micotoxinas ST-2000A

O analisador de micotoxinas ST-2000A é um instrumento analítico necessário para aflatoxina e ensaio imunoenzimático. O princípio do ensaio imunoenzimático de fase sólida (ELISA), nomeadamente ensaio imunoenzimático (ELISA), é composto por este instrumento e kit B1, que pode ser usado para determinar o conteúdo de aflatoxina B1 e outras micotoxinas em amostras de forma limitada e quantitativa (se equipado com outros kits, outras toxinas podem ser detectadas). É amplamente utilizado na detecção de aflatoxina B1 e outras micotoxinas em alimentos, rações, óleos, laticínios, medicamentos, bebidas, vinho e outros produtos.

Características de desempenho:

1. Operação de exibição: tela LCD colorida, placa de distribuição de videofone, exibição de informações completas da placa, operação com tela de toque

2. Função da placa vibratória: Velocidade da placa vibratória de nível 3, tempo 0-255 segundos ajustável

3. Estação de trabalho: software profissional de marcador enzimático, que pode armazenar 500 grupos de programas, 100.000 resultados de amostra e fornecer modos de cálculo ricos, como absorbância, equação linear, equação logarítmica, equação quadrática, equação cúbica, equação logarítmica de porcentagem de concentração de absorbância, spline função, taxa de inibição, etc.

Parâmetros técnicos:

Fonte de luz: lâmpada halógena importada DC12V 22W

Faixa de comprimento de onda: 400-900 nm

Filtro: 405, 450, 492, 630 nm como padrão, outros comprimentos de onda opcionais

Faixa de leitura: 0-4.000Abs

Resolução: 0,001 Abs

Erro de indicação:≤±0,01Abs

Estabilidade: ≤±0,003Abs

Repetibilidade: ≤ 0,3%

Tamanho:400mm×260mm×200mm

1 Princípio e aplicação

Este kit utiliza o método ELISA competitivo indireto para detectar aflatoxina B1 (AFB1) em grãos, rações e outras amostras. O kit é composto por placa marcada com enzima pré-revestida com antígeno de acoplamento, marcador enzimático de raiz-forte, anticorpo, padrão e outros reagentes correspondentes. Durante o teste, adicione a solução padrão ou amostra, a aflatoxina B1 na amostra e a placa enzimática são pré-revestidas com o antígeno conjugado para competir pelo anticorpo anti-aflatoxina B1. Após adicionar o marcador enzimático, utilize o substrato TMB para desenvolver a cor. O valor de absorvância da amostra está negativamente correlacionado com o teor de aflatoxina B1 contida na amostra. A quantidade residual de aflatoxina B1 na amostra pode ser obtida comparando com a curva padrão.

2 Indicadores técnicos

2.1 Sensibilidade do kit: 0,03 ppb (ng/ml)

2.2 Modo de reação:25 ℃, 30min~15min

2.3 Limite inferior de detecção:

Cereais................................................. ..... 0,15 ppb

Alimentação com fórmula........................................ 0,3 ppb

Óleo comestível, amendoim................................... 0,6ppb

Molho de soja, trigo e outros alimentos.............................. 0,3 ppb

Cerveja................................................. 0,3 ppb

Vinho, molho de soja, vinagre................................. 0,15ppb

2.4 Taxa de reação cruzada:

Aflatoxina B1 100%

2.5 Taxa de recuperação de amostra:

Cereais e fórmulas alimentares............................... 85% ± 15%

Amendoim........................................ 82 ± 15%

Óleo comestível................................... 85 ± 15%

Molho de soja, trigo e outros alimentos.............................. 83 ± 15%

Cerveja.................................. 84 ± 15%

Vinho, molho de soja, vinagre............ 87 ± 15%

3 Composição do kit

Placa marcadora de enzimas................................... 96 furos

Solução padrão (capa preta): 1ml cada

0ppb,0,03ppb,0,06ppb,0,12ppb,0,24ppb,0,48ppb

Solução de alto padrão: 100ppb.............................. 1ml

Marcador enzimático (tampa vermelha)............................... 5,5ml

Solução de trabalho de anticorpo (tampa azul)........................ 5,5ml

Solução de substrato A (tampa branca)........................ 6ml

Substrato líquido B (tampa preta)........................ 6ml

Solução de terminação (tampa amarela)........................ 6ml

Solução de lavagem concentrada 20X (tampa branca).................... 40ml

Manual de instruções....................1cópia

4 Equipamentos e reagentes necessários

4.1 Aparelhos: testador de aflatoxina, impressora, homogeneizador, dispositivo de secagem de nitrogênio, oscilador, centrífuga, pipeta graduada, balança (sensibilidade 0,01g)

4.2 Micropipeta: canal único 20 µ l-200 µ l, 100 µ l-1000 µ l, multicanal 300 µ l

4.3 Reagente: metanol, n-hexano, triclorometano ou diclorometano

5 Pré-tratamento de amostra

5.1 Instruções antes do processamento da amostra:

O aparato experimental deve estar limpo e utilizar cabeçote de sucção descartável para evitar contaminação e interferência nos resultados experimentais.

5.2 Preparação da solução:

Solução 1: extrato de amostra

70% de metanol, ou seja, V metanol: V água desionizada＝7:3.

5.3 Amostra de etapas de pré-tratamento:

5.3.1 Método de processamento de grãos

1) Pesar 2g de amostra triturada em um tubo de centrífuga de 50ml, adicionar 5ml de solução de extração de amostra, agitar por 5 minutos, 4000 rpm em temperatura ambiente/10 minutos de centro de separação;

2) Pegue 0,5ml de sobrenadante, adicione 0,5ml de água deionizada e misture bem;

3) Faça uma análise de 50 μL.

Proporção de diluição da amostra: 5 Limite inferior de detecção: 0,15ppb

5.3.2 Métodos de processamento para amostras com forte absorção de água, como casca de milho e farelo de trigo

1) Pesar 2g de amostra triturada em um tubo de centrífuga de 50ml, adicionar 20ml de solução de extração de amostra, agitar por 5 minutos, 4000 rpm em temperatura ambiente/10 minutos de centro de separação;

2) Pegue 0,5ml de sobrenadante, adicione 0,5ml de água deionizada e misture bem; (Para a amostra com teor extremamente alto de toxina, ela pode ser diluída com 35% de metanol e depois testada. Por exemplo, tomar 0,1ml da solução misturada em 2) e 0,9ml de 35% de metanol para misturar. A razão final de diluição da amostra é 200 e o limite de detecção é 6ppb.)

3) Faça uma análise de 50 μL.

Proporção de diluição da amostra: 20 Limite inferior de detecção: 0,6 ppb

Nota: Como a distribuição da toxina na amostra é desigual, é necessário colher amostras de vários pontos e misturá-las totalmente antes de colher 2g para teste.

5.3.3 Método de processamento de fórmula alimentar

1) Pesar 2g de amostra triturada em um tubo de centrífuga de 50ml, adicionar 10ml de solução de extração de amostra, agitar por 5 minutos, 4000 rpm em temperatura ambiente/10 minutos de centro de separação;

2) Pegue 0,5ml de sobrenadante, adicione 0,5ml de água deionizada e misture bem;

3) Faça uma análise de 50 μL.

Proporção de diluição da amostra: 10 Limite inferior de detecção: 0,3ppb

5.3.4 Métodos de tratamento de ração com óleo comestível, amendoim e alto teor de gordura

1) Pesar 2g de amostra triturada em um tubo de centrífuga de 50ml, adicionar 8ml de n-hexano e 10ml de solução de extração de amostra, agitar por 5min, 4000 rpm em temperatura ambiente/10 min de centro de separação;

2) Retire o líquido superior, pegue 0,5ml do líquido inferior e adicione 0,5ml de água deionizada, misture bem, depois pegue 0,5ml do líquido misturado e adicione 0,5ml de metanol 35%, agite por 30s;

3) Faça uma análise de 50 μL.

Proporção de diluição da amostra: 20 Limite inferior de detecção: 0,6 ppb

5.3.5 Alimentos ou condimentos, como molhos, trigo, biscoitos, doces e métodos de processamento de rações, como concentrado de rações

1) Pesar 2g de amostra triturada em um tubo de centrífuga de 50ml, adicionar 10ml de solução de extração de amostra, agitar por 5 minutos, 4000 rpm em temperatura ambiente/10 minutos de centro de separação;

2) Retirar 2ml de sobrenadante, adicionar 4ml de triclorometano (ou diclorometano), agitar por 5 minutos, 4000 rpm em temperatura ambiente/10 minutos de centro de separação;

3) Transfira o líquido superior para outro recipiente, deixe o líquido inferior em espera, adicione mais 4ml de clorofórmio (ou diclorometano) ao líquido superior, agite totalmente e misture por 5 minutos, e a temperatura ambiente é 4000 rpm/centro de separação para 10 minutos;

4) Retire o líquido superior, misture o líquido inferior duas vezes e misture bem;

5) Pegue 2ml do líquido inferior combinado e seque sob nitrogênio de 50-60 ℃;

6) Adicione 0,5ml de extrato de amostra para dissolver completamente a substância seca e, em seguida, adicione 0,5ml de água deionizada para misturar;

7) Faça uma análise de 50 μL.

Proporção de diluição da amostra: 10 Limite inferior de detecção: 0,3ppb

5.3.6 Método de processamento de cerveja

1) Mexa bem a cerveja (remova o CO2), pegue 2ml de amostra de cerveja, adicione 1ml de água destilada, adicione 7ml de metanol e agite por 5min;

2) Pegue 0,5ml de solução de amostra mista e adicione 0,5ml de água deionizada para misturar bem;

3) Faça uma análise de 50 μL.

Proporção de diluição da amostra: 10 Limite inferior de detecção: 0,3ppb

5.3.7 Método de tratamento de vinho, molho de soja e vinagre

1) Retire 2ml de amostra, adicione 2ml de água destilada, adicione 10ml de triclorometano (ou diclorometano), agite por 5 minutos, 4000 rpm em temperatura ambiente/10 minutos de centro de separação;

2) Pegue 1ml do líquido inferior e seque sob nitrogênio de 50-60 ℃;

3) Adicione 0,5ml de extrato de amostra para dissolver completamente a substância seca, depois adicione 0,5ml de água deionizada e misture bem;

5) Faça uma análise de 50 μL.

Proporção de diluição da amostra: 5 Limite inferior de detecção: 0,15ppb

6 etapas do ELISA

Retire o reagente necessário do ambiente de armazenamento refrigerado a 4 ℃ e coloque-o em temperatura ambiente por mais de 30 minutos. Pode haver cristais que precisem ser restaurados à temperatura ambiente para se dissolverem completamente quando a solução de lavagem for armazenada a frio. Cada reagente líquido deve ser agitado antes do uso. Retire o número necessário de placas e molduras microporosas, coloque as placas microporosas não utilizadas em sacos autovedantes e armazene-as entre 2 e 8 ℃.

Antes do experimento, 20 × A solução de lavagem concentrada é diluída na solução de lavagem de trabalho 20 vezes.

6.1 Numeração: numere os poços correspondentes da amostra e do padrão em sequência, faça dois furos paralelos para cada amostra e padrão e registre a posição do furo padrão e do furo da amostra.

6.2 Reação de adição de amostra: adicionar 50 µ l/poço de padrão ou amostra em seus respectivos poços, depois adicionar 50 µ l/poço de marcador enzimático, em seguida adicionar 50 µ l/poço de solução de trabalho de anticorpo, selar a placa com uma placa de cobertura membrana, agite suavemente por 5 segundos, misture e reaja a 25 ℃ por 30 minutos.

6.3 Lavagem: Remova cuidadosamente a membrana da placa de cobertura, seque o líquido no orifício, lave completamente o orifício com solução de lavagem de trabalho 250 µ l/orifício por 5 vezes, com intervalo de 30 segundos, e seque com papel absorvente (o bolhas que não são removidas após o tapinha podem ser perfuradas com uma cabeça de pistola limpa).

6.4 Desenvolvimento de cor: adicione 50 µ l de solução de substrato A e 50 µ l de solução de substrato B a cada furo, agite suavemente por 5 segundos e misture bem, e desenvolva a cor no escuro a 25 ℃ por 15 minutos.

6.5 Terminação: adicionar 50 µl de solução de terminação a cada furo, agitar suavemente e misturar bem para terminar a reação.

6.6 Medição do valor de absorção: use o testador de aflatoxina para medir o valor de absorção de cada furo a 450 nm (recomenda-se comprimento de onda duplo 450/630 nm). A determinação deve ser concluída dentro de 10 minutos após o término da reação

6.7 O testador automático de aflatoxina ST-2000A completa automaticamente a determinação e produz automaticamente os resultados.